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质粒图谱(史上最全质粒图谱及看法,值得收藏!)

泰宁新闻网 http://www.tainingxinwen.cn 2021-03-21 15:34 出处:网络
如下介绍的质粒图谱(史上最全质粒图谱及看法,值得收藏!),资深小编为您介绍下质粒图谱

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作者:解螺旋·麦子
如需转载请注明来源:解螺旋·医生科研助手
导语
每当拿到一个质粒图谱,第一反应就是一脸懵,这是什么玩意?这些ori、RBS、tet是什么鬼?这些箭头代表什么,转录的方向吗?为什么都不相同,不会“撞车”么?这玩意究竟怎么看啊?
如何看懂质粒图谱
Step 1:先了解质粒的基本组成元素,Ori复制起始点、抗性基因有哪些、多克隆位点在哪里,有哪些酶切位点?有哪些荧光标记或蛋白标签序列?

Step 2:看质粒是否是表达载体,如果是,那就必定有这些原件:启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。

Step 3:弄清楚方向。为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针?那其实是代表两条 DNA 链,即质粒是环状双链 DNA,它的启动子等在其中一条链上,而它的某些基因在另一条链上。当然,最重要的是要弄清楚目的基因插入那一段(从T7启动子到终止子那一段)的方向,即下图黄色圈圈所示的箭头方向,其它的大可以忽略。

质粒盛宴,可打包带走


pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(+),构建表达载体常用思密达~

强大的pEGFP质粒家族,构建具有绿色荧光的融合蛋白,麦子的挚爱~

pUC19常用于DNA片段克隆、DNA测序、外源基因表达等

带DYKDDDDKtag的pCMV-C/N质粒及其多克隆位点


pAAV-IRES-hrGFP腺病毒相关载体

·······

pET质粒系列该系列是大肠杆菌克隆表达重组蛋白很强大的系统,目的基因被克隆到pET质粒载体上,受噬菌体T7强转录及翻译调控,宿主细胞提供的T7RNA聚合酶诱导其表达。

pLVX-IRES-ZsGreen1及其克隆位点,哺乳动物细胞慢病毒表达载体,载体能够同时表达ZsGreen1荧光蛋白和目的基因



腺病毒穿梭质粒pShuttle系列


pDsRED1-C1: C代表在DsRed1的C段插入序列构建融合蛋白

pDsRED1-C1: C代表在DsRed1的N段插入序列构建融合蛋白

DsRed蛋白单体突变的载体,pDsRED系列载体,属于荧光蛋白报告载体

pLazl质粒,可以提供lac阻遏蛋白

质粒pLysS&E,具有氯霉素抗性。此质粒含有表达T7 溶菌酶的基因。


pSCREEN-1b(+)质粒,也含有表达T7 溶菌酶的基因


pMAL-p5X:大肠杆菌(E.coli)表达载体,用于蛋白表达与纯化

pGEX载体系列,特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度


p3XFLAG-Myc-CMV质粒,For transient expression and secretion of dual tagged (N-terminal 3XFLAG?, C-terminal c-myc) fusion proteins.
即双重标记瞬时表达和分泌,N端 3XFLAG标记,C端c-myc标记,一看这质粒就知道逼格高、价格较贵~
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